微(wei)生(sheng)物限度(du)檢(jian)測(ce)原理和(he)應(ying)用範(fan)圍(wei)

微(wei)生(sheng)物的檢(jian)測(ce)，無(wu)論在(zai)理論(lun)研究還是在生(sheng)產(chan)實(shi)踐(jian)中(zhong)都具(ju)有(you)重要(yao)的意義，本文(wen)對(dui)生(sheng)長(chang)量(liang)測(ce)定法(fa)、微(wei)生(sheng)物計(ji)數(shu)法(fa)、生(sheng)理指(zhi)標法(fa)和商(shang)業化(hua)快(kuai)速微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)簡要(yao)介紹(shao)了(le)利用微(wei)生(sheng)物重量，體(ti)積，大(da)小，生(sheng)理代(dai)謝物(wu)等指(zhi)標的二十余種(zhong)常用(yong)的檢(jian)測(ce)方法(fa)，簡要(yao)介紹(shao)了(le)這些(xie)方(fang)法(fa)的原理，應(ying)用範(fan)圍(wei)和優(you)缺點。
　　壹個微(wei)生(sheng)物細(xi)胞(bao)在合適(shi)的外界條件(jian)下(xia)，不(bu)斷(duan)的吸收營養物質(zhi)，並(bing)按(an)自己(ji)的代(dai)謝方(fang)式進行新陳代(dai)謝。如果同(tong)化(hua)作用(yong)的速度(du)超過(guo)了(le)異化(hua)作用(yong)，則(ze)其原生(sheng)質(zhi)的總量（重量，體(ti)積，大(da)小）就(jiu)不斷(duan)增(zeng)加(jia)，於(yu)是出現(xian)了個(ge)體的生(sheng)長(chang)現(xian)象(xiang)。如果這是壹種(zhong)平(ping)衡生(sheng)長(chang)，即(ji)各(ge)細胞(bao)組(zu)分(fen)是按(an)恰(qia)當的比例增(zeng)長(chang)時(shi)，則(ze)達(da)到程度(du)後就(jiu)會(hui)發(fa)生(sheng)繁殖，從而引(yin)起(qi)個體(ti)數(shu)目(mu)的增(zeng)加(jia)，這時(shi)，原有(you)的個體已經發展成(cheng)壹(yi)個(ge)群體。隨(sui)著(zhe)群(qun)體(ti)中(zhong)各(ge)個個體(ti)的進壹步生(sheng)長(chang)，就(jiu)引(yin)起(qi)了這壹(yi)群(qun)體的生(sheng)長(chang)，這可(ke)從(cong)其體(ti)積、重量、密(mi)度(du)或(huo)濃度(du)作指(zhi)標來衡量。微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)不(bu)同(tong)於其他(ta)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)，微(wei)生(sheng)物的個體生(sheng)長(chang)在(zai)科(ke)研(yan)上有(you)困(kun)難，通(tong)常情(qing)況下(xia)也沒(mei)有(you)實(shi)際意(yi)義。微(wei)生(sheng)物是以(yi)量(liang)取(qu)勝的，因此，微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)通(tong)常指(zhi)群體(ti)的擴增(zeng)。微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)繁殖是其在(zai)內外各(ge)種(zhong)環境(jing)因(yin)素(su)相互(hu)作(zuo)用(yong)下(xia)的綜合反(fan)映。因此生(sheng)長(chang)繁殖情況就(jiu)可(ke)作(zuo)為(wei)研究(jiu)各(ge)種(zhong)生(sheng)理生(sheng)化(hua)和遺(yi)傳等問(wen)題(ti)的重要(yao)指(zhi)標，同(tong)時(shi)，微(wei)生(sheng)物在(zai)生(sheng)產(chan)實(shi)踐(jian)上的各(ge)種(zhong)應(ying)用或(huo)是對致(zhi)病(bing)，黴腐微(wei)生(sheng)物的防(fang)治(zhi)都和他們的生(sheng)長(chang)抑(yi)制(zhi)緊(jin)密(mi)相關。所以(yi)有(you)必要(yao)介紹(shao)壹(yi)下微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)情(qing)況的檢(jian)測(ce)方法(fa)。既(ji)然生(sheng)長(chang)意(yi)味著(zhe)原生(sheng)質(zhi)含(han)量(liang)的增(zeng)加(jia)，所以(yi)測(ce)定的方法(fa)也都直(zhi)接或(huo)間(jian)接的以(yi)次為(wei)根據，而(er)測(ce)定繁殖則(ze)都要(yao)建(jian)立在計(ji)數(shu)這壹(yi)基(ji)礎(chu)上。微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)的衡量，可(ke)以(yi)從(cong)其重量，體(ti)積，密(mi)度(du)，濃度(du)，做指(zhi)標來進行衡(heng)量。
　　1. 微(wei)生(sheng)物計(ji)量法(fa)
　　1.1 體積測(ce)量法(fa)
　　又稱(cheng)測(ce)菌絲(si)濃度(du)法(fa)，通(tong)過(guo)測(ce)定體(ti)積培養液中(zhong)所含(han)菌(jun)絲(si)的量來反映微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況。方(fang)法(fa)是，取量(liang)的待測(ce)培養液（如10 mL）放在(zai)有(you)刻(ke)度(du)的離心管中(zhong)，設定(ding)的離心時(shi)間(jian)（如5 min）和轉(zhuan)速(su)（如5000 rpm），離心後，倒(dao)出上清夜，測(ce)出上清夜體積為(wei)v，則(ze)菌(jun)絲(si)濃度(du)為(wei)（10-v）/10。菌絲(si)濃度(du)測(ce)定法(fa)是大規(gui)模(mo)工(gong)業(ye)發(fa)酵(jiao)生(sheng)產(chan)上微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)的壹個重要(yao)監(jian)測(ce)指標。這種(zhong)方法(fa)比較粗(cu)放(fang)，簡(jian)便，快(kuai)速，但(dan)需(xu)要(yao)設定(ding)壹(yi)致的處理條件(jian)，否(fou)則(ze)偏差(cha)很大，由(you)於離心沈澱(dian)物中(zhong)夾(jia)雜(za)有(you)壹(yi)些(xie)固(gu)體營養物，結(jie)果會(hui)有(you)偏差(cha)。
　　稱(cheng)幹重法(fa)
　　可(ke)用(yong)離心或(huo)過(guo)濾(lv)法(fa)測(ce)定。壹(yi)般(ban)幹(gan)重為(wei)濕重的10~20%。在離心法(fa)中(zhong)，將(jiang)體積待測(ce)培養液倒(dao)入離心管中(zhong)，設定(ding)的離心時(shi)間(jian)和轉(zhuan)速(su)，進行離心，並(bing)用清水離心洗(xi)滌1~5次，進行幹(gan)燥(zao)。幹(gan)燥(zao)可(ke)用(yong)烘箱(xiang)在(zai)105 ℃或(huo)100 ℃下烘幹(gan)，或(huo)采用紅(hong)外線烘(hong)幹(gan)，也可(ke)在(zai)80 ℃或(huo)40 ℃下真空(kong)幹燥(zao)，幹(gan)燥(zao)後(hou)稱(cheng)重。如用過(guo)濾(lv)法(fa)，絲(si)狀(zhuang)真菌(jun)可(ke)用(yong)濾紙(zhi)過(guo)濾(lv)，細菌(jun)可(ke)用(yong)醋酸纖(xian)維膜等濾(lv)膜過(guo)濾(lv)，過(guo)濾(lv)後用(yong)少(shao)量(liang)水洗(xi)滌，在40 ℃下(xia)進行真空(kong)幹燥(zao)。稱(cheng)幹重發法(fa)較為(wei)煩瑣(suo)，通(tong)常獲(huo)取的微(wei)生(sheng)物產(chan)品(pin)為(wei)菌體(ti)時(shi)，常采(cai)用這種(zhong)方法(fa)，如活性(xing)幹(gan)酵(jiao)母(mu)（Activity Dry Yeast, ADY）,壹(yi)些(xie)以(yi)微(wei)生(sheng)物菌(jun)體為(wei)活性(xing)物(wu)質(zhi)的飼料和肥(fei)料。
　　1.3 比濁法(fa)
　　微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)引(yin)起(qi)培養物混濁度(du)的增(zeng)高(gao)。通(tong)過(guo)紫外分(fen)光光度(du)計測(ce)定波(bo)長(chang)下(xia)的吸光值，判(pan)斷(duan)微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況。對(dui)某(mou)壹培養物內(nei)的菌體生(sheng)長(chang)作(zuo)定(ding)時(shi)跟蹤(zong)時(shi)，可(ke)采(cai)用壹(yi)種(zhong)特制(zhi)的有(you)側(ce)臂(bi)的三角燒瓶。將(jiang)側(ce)臂(bi)插入(ru)光電比色(se)計的比色(se)座孔(kong)中(zhong)，即(ji)可(ke)隨(sui)時(shi)測(ce)定其生(sheng)長(chang)情(qing)況，而(er)不(bu)必取(qu)菌液。該法(fa)主要(yao)用(yong)於(yu)發(fa)酵(jiao)工業(ye)菌(jun)體(ti)生(sheng)長(chang)監(jian)測(ce)。如使(shi)用UNICO公司的紫外-可(ke)見分(fen)光光度(du)計，在(zai)波長(chang)600 nm處(chu)用(yong)比色(se)管定時(shi)測(ce)定發(fa)酵液(ye)的吸光光度(du)值OD600，以(yi)此監(jian)控(kong)E.coli的生(sheng)長(chang)及(ji)誘導(dao)時(shi)間(jian)。
　　1.4 菌絲(si)長(chang)度(du)測(ce)量法(fa)
　　對於(yu)絲(si)狀(zhuang)真菌(jun)和壹(yi)些(xie)放(fang)線菌(jun)，可(ke)以(yi)在(zai)培養基(ji)上測(ce)定時(shi)間(jian)內菌(jun)絲(si)生(sheng)長(chang)的長(chang)度(du)，或(huo)是利用(yong)壹只(zhi)壹端開(kai)口並(bing)帶(dai)有(you)刻(ke)度(du)的細玻璃管，到入合適(shi)的培養基(ji)，臥(wo)放，在(zai)開口的壹端接種(zhong)微(wei)生(sheng)物，壹(yi)段時(shi)間(jian)後記(ji)錄其菌(jun)絲(si)生(sheng)長(chang)長(chang)度(du)，借此衡(heng)量(liang)絲(si)狀(zhuang)微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)。
　　2. 微(wei)生(sheng)物計(ji)數(shu)法(fa)
　　2.1 血(xue)球(qiu)計數(shu)板(ban)法(fa)
　　血(xue)球(qiu)計數(shu)板(ban)是壹種(zhong)有(you)結(jie)構刻(ke)度(du)和厚(hou)度(du)的厚玻璃片(pian)，玻(bo)片(pian)上有(you)四條溝(gou)和(he)兩條脊，中(zhong)央有(you)壹(yi)短(duan)橫(heng)溝(gou)和兩個平(ping)臺，兩脊的表比兩平(ping)臺的表面高(gao)0.1 mm，每(mei)個(ge)平(ping)臺上刻(ke)有(you)不(bu)同(tong)規(gui)格的格網，中(zhong)央0.1 mm2面積上刻(ke)有(you)400個(ge)小(xiao)方(fang)格(ge)。通(tong)過(guo)油鏡觀(guan)察，統計大格(ge)內(nei)微(wei)生(sheng)物的數(shu)量(liang)，即(ji)可(ke)算出1 mL菌液中(zhong)所含(han)的菌體數(shu)。這種(zhong)方法(fa)簡便(bian)，直(zhi)觀(guan)，快(kuai)捷，但(dan)只(zhi)適宜(yi)於單(dan)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態的微(wei)生(sheng)物或(huo)絲(si)狀(zhuang)微(wei)生(sheng)物所產(chan)生(sheng)的孢子進行計(ji)數(shu)，並(bing)且所得結(jie)果是包括死(si)細胞(bao)在內的總菌數(shu)。
　　2.2 染(ran)色(se)計數(shu)法(fa)
　　為(wei)了彌(mi)補壹些(xie)微(wei)生(sheng)物在(zai)油鏡下不易(yi)觀(guan)察計數(shu)，而(er)直(zhi)接用血(xue)球(qiu)計數(shu)板(ban)法(fa)又無(wu)法(fa)區分(fen)死(si)細胞(bao)和活細胞(bao)的不足(zu)，人們發明了染(ran)色(se)計數(shu)法(fa)。借助(zhu)不(bu)同(tong)的染料對菌(jun)體(ti)進行適(shi)當的染色(se)，可(ke)以(yi)更(geng)方(fang)便(bian)的在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下進行活(huo)菌計數(shu)。如酵母(mu)活(huo)細胞(bao)計數(shu)可(ke)用(yong)美藍染色(se)液，染(ran)色(se)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，活細胞(bao)為(wei)無(wu)色(se)，而死(si)細胞(bao)為(wei)藍色(se)。
　　2.3 比例計數(shu)法(fa)
　　將(jiang)已知(zhi)顆(ke)粒(li)（如黴菌孢子或(huo)紅(hong)細胞(bao)）濃度(du)的液體與壹待測(ce)細胞(bao)濃度(du)的菌液按(an)比例均(jun)勻(yun)混合，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)視野中(zhong)數(shu)出(chu)各(ge)自的數(shu)目(mu)，即(ji)可(ke)得未知菌(jun)液的細胞(bao)濃度(du)。這種(zhong)計數(shu)方(fang)法(fa)比較粗(cu)放(fang)。並(bing)且需(xu)要(yao)配(pei)制(zhi)已(yi)知(zhi)顆粒濃(nong)度(du)的懸液做標準。
　　2.4 液體(ti)稀釋(shi)法(fa)
　　對未(wei)知(zhi)菌(jun)樣做(zuo)連(lian)續(xu)十倍系列稀釋，根據估(gu)計(ji)數(shu)，從(cong)適(shi)宜(yi)的三個(ge)連(lian)續(xu)的10倍稀釋液(ye)中(zhong)各(ge)取5 mL試樣，接種(zhong)1 mL到3組(zu)共15只(zhi)裝(zhuang)培養液的試管中(zhong)，經培養後記(ji)錄每(mei)個(ge)稀釋度(du)出現(xian)生(sheng)長(chang)的試管數(shu)，然(ran)後(hou)查大(da)或(huo)然數(shu)表(biao)MPN（Most Probable Number）得出菌樣的含菌數(shu)，根據樣品(pin)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)計(ji)算出活菌含(han)量(liang)。該(gai)法(fa)常用(yong)於食(shi)品中(zhong)微(wei)生(sheng)物的檢(jian)測(ce)，例如飲用(yong)水和(he)牛奶的微(wei)生(sheng)物。
　　2.5 平(ping)板菌落計(ji)數(shu)法(fa)
　　這是壹種(zhong)常用(yong)的活菌計數(shu)法(fa)。將(jiang)待測(ce)菌液(ye)進行梯度(du)稀釋(shi)，取體(ti)積的稀釋菌液(ye)與合適(shi)的固體培養基(ji)在凝(ning)固(gu)前(qian)均(jun)勻(yun)混合，或(huo)將(jiang)菌液(ye)塗(tu)布(bu)於(yu)已(yi)凝(ning)固的固體培養基(ji)平(ping)板上。保溫(wen)培養後，用(yong)平(ping)板上出現(xian)的菌落數(shu)乘以(yi)菌(jun)液(ye)稀(xi)釋(shi)度(du)，即(ji)可(ke)算出原菌液(ye)的含菌數(shu)。壹(yi)般(ban)以(yi)直(zhi)徑(jing)9 cm的平(ping)板上出現(xian)50~500個菌(jun)落為(wei)宜。但(dan)方(fang)法(fa)比較麻(ma)煩，操(cao)作者(zhe)需(xu)有(you)熟(shu)練(lian)的技術(shu)。平(ping)板菌落計(ji)數(shu)法(fa)不僅(jin)可(ke)以(yi)得出菌液(ye)中(zhong)活(huo)菌(jun)的含菌數(shu)，而(er)且同(tong)時(shi)將(jiang)菌液(ye)中(zhong)的細菌進行了(le)壹次分(fen)離培養，獲得了單(dan)克(ke)隆。
　　2.6 試(shi)劑(ji)紙(zhi)
　　在(zai)平(ping)板計數(shu)法(fa)的基(ji)礎(chu)上，發展了(le)小型(xing)商(shang)品化(hua)產(chan)品(pin)以(yi)供(gong)快(kuai)速計(ji)數(shu)用(yong)。形(xing)式有(you)小(xiao)型(xing)厚(hou)濾(lv)紙(zhi)片(pian)，瓊(qiong)脂(zhi)片(pian)等。在(zai)濾(lv)紙(zhi)和(he)瓊脂(zhi)片(pian)中(zhong)吸(xi)有(you)合適(shi)的培養基(ji)，其中(zhong)加(jia)入(ru)活(huo)性(xing)指(zhi)示(shi)劑(ji)2, 3, 5-氯(lv)化(hua)三苯(ben)基(ji)四氮(dan)唑(zuo)（TTC，無(wu)色(se)）待蘸(zhan)取(qu)測(ce)試菌(jun)液後(hou)置密封包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)培養。短期(qi)培養後在(zai)濾紙(zhi)上出現(xian)密度(du)的玫(mei)瑰色(se)微(wei)小(xiao)菌落與標準紙(zhi)色(se)板上圖譜(pu)比較即(ji)可(ke)估(gu)算出樣品(pin)的含菌量。試(shi)劑(ji)紙(zhi)法(fa)計數(shu)快(kuai)捷準確(que)，相比而言避免了平(ping)板計數(shu)法(fa)的人為(wei)操作(zuo)誤差(cha)。
　　2.7 膜過(guo)濾(lv)法(fa)
　　用特(te)殊(shu)的濾膜過(guo)濾(lv)體積的含菌樣品(pin)，經丫(ya)叮(ding)橙染色(se)，在紫外顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)的熒(ying)光，活細(xi)胞(bao)會(hui)發(fa)橙色(se)熒(ying)光，而死(si)細胞(bao)則(ze)發(fa)綠色(se)熒(ying)光。
　　3. 間(jian)接測(ce)定法(fa)
　　微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)伴(ban)隨(sui)著(zhe)壹(yi)系列生(sheng)理指(zhi)標發生(sheng)變化(hua)，例如酸堿(jian)度(du)，發酵(jiao)液中(zhong)的含氮(dan)量，含糖量(liang)，產(chan)氣(qi)量(liang)等，與生(sheng)長(chang)量(liang)相平(ping)行的生(sheng)理指(zhi)標很多，它(ta)們可(ke)作(zuo)為(wei)生(sheng)長(chang)測(ce)定的相對(dui)值。因此可(ke)利(li)用生(sheng)理指(zhi)標等間(jian)接參數(shu)來測(ce)定生(sheng)物量(liang)。
　　3.1 測(ce)定含(han)氮(dan)量
　　大多數(shu)細(xi)菌(jun)的含氮(dan)量為(wei)幹重的12.5%，酵母(mu)為(wei)7.5%，黴菌為(wei)6.0%。根據含(han)氮(dan)量×6.25，即(ji)可(ke)測(ce)定粗(cu)蛋(dan)白(bai)的含量。含氮(dan)量的測(ce)定方(fang)法(fa)有(you)很多，如用硫(liu)酸，過(guo)氯(lv)酸，碘(dian)酸，磷(lin)酸等消(xiao)化(hua)法(fa)和Dumas測(ce)N2氣法(fa)。Dumas測(ce)N2氣法(fa)是將(jiang)樣品(pin)與CuO混合，在(zai)CO2氣(qi)流中(zhong)加(jia)熱(re)後(hou)產(chan)生(sheng)氮(dan)氣，收集(ji)在(zai)呼吸(xi)計(ji)中(zhong)，用(yong)KOH吸(xi)去CO2後(hou)即(ji)可(ke)測(ce)出N2的量。
　　3.2 測(ce)定含(han)碳量(liang)
　　將(jiang)少量(liang)（幹(gan)重0.2~2.0 mg）生(sheng)物材(cai)料(liao)混入1 mL水或(huo)無(wu)機(ji)緩(huan)沖液中(zhong)，用(yong)2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下(xia)加(jia)熱(re)30分(fen)鐘後(hou)冷卻(que)。加水稀(xi)釋(shi)至5 mL，在(zai)580 nm的波長(chang)下(xia)讀(du)取(qu)吸光光度(du)值，即(ji)可(ke)推(tui)算出生(sheng)長(chang)量(liang)。需(xu)用(yong)試(shi)劑(ji)做(zuo)空(kong)白(bai)對(dui)照，用標準樣品(pin)做(zuo)標準曲(qu)線。
　　還原糖測(ce)定法(fa)
　　還原糖通(tong)常是指單(dan)糖或(huo)寡糖，可(ke)以(yi)被(bei)微(wei)生(sheng)物直(zhi)接利用(yong)，通(tong)過(guo)還原糖的測(ce)定可(ke)間(jian)接反映微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況，常用(yong)於大(da)規(gui)模(mo)工(gong)業(ye)發(fa)酵(jiao)生(sheng)產(chan)上微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)的常規(gui)監(jian)測(ce)。方法(fa)是，離心發酵(jiao)液，取上清液，加(jia)入(ru)斐林試(shi)劑(ji)，沸(fei)水浴(yu)煮沸(fei)3分(fen)鐘，取(qu)出加(jia)少許(xu)鹽酸酸化(hua)，加入(ru)Na2S2O3臨近終點時(shi)加入(ru)澱粉(fen)溶液，繼(ji)續加(jia)Na2S2O3至(zhi)終(zhong)點，查表(biao)讀(du)出(chu)還原糖的含量。
　　3.4 氨(an)基(ji)氮(dan)的測(ce)定
　　離心發酵(jiao)液，取上清液，加(jia)入(ru)甲基(ji)紅(hong)和鹽酸作(zuo)指示(shi)劑(ji)，加(jia)入(ru)0.02 mol/L的NaOH調色(se)至顏(yan)色(se)剛剛(gang)褪去，加(jia)入(ru)底物18%的中(zhong)性(xing)甲(jia)醛，反應(ying)數(shu)刻(ke)，加(jia)入(ru)0.02 mol/L的使(shi)之變色(se)，根據NaOH的用量折算出氨(an)基(ji)氮(dan)的含量。根據培養液中(zhong)氨(an)基(ji)氮(dan)的含量，可(ke)間(jian)接反映微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況。
　　3.5 其他(ta)生(sheng)理物(wu)質(zhi)的測(ce)定
　　P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙(yi)酰胞(bao)壁酸）等含(han)量(liang)以(yi)及(ji)產(chan)酸，產(chan)氣(qi)，產(chan)CO2（用(yong)標記葡(pu)萄(tao)糖做(zuo)基(ji)質(zhi)），耗(hao)氧，黏(nian)度(du)，產(chan)熱(re)等指(zhi)標，都可(ke)用(yong)於生(sheng)長(chang)量(liang)的測(ce)定。也可(ke)以(yi)根據反(fan)應(ying)前(qian)後(hou)的基(ji)質(zhi)濃(nong)度(du)變化(hua)，終產(chan)氣(qi)量(liang)，微(wei)生(sheng)物活(huo)性(xing)三方(fang)面(mian)的測(ce)定反(fan)映微(wei)生(sheng)物的生(sheng)長(chang)。如在BMP-2的發酵生(sheng)產(chan)上，隨時(shi)監(jian)測(ce)溶氧(yang)量的變化(hua)和酸堿(jian)度(du)的變化(hua)，判(pan)斷(duan)細(xi)菌(jun)的長(chang)勢。
　　4. 商(shang)業化(hua)快(kuai)速微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)法(fa)
　　微(wei)生(sheng)物的檢(jian)測(ce)，其發(fa)展方(fang)向是快(kuai)速，準確(que)，簡便(bian)，自動(dong)化(hua)，當前(qian)很多生(sheng)物制(zhi)品(pin)公司利(li)用傳(chuan)統(tong)微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)原理，結(jie)合不(bu)同(tong)的檢(jian)測(ce)方法(fa)，設計(ji)了(le)形式各(ge)異的微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)儀器(qi)設備(bei)，正逐步廣泛(fan)應(ying)用於(yu)醫學(xue)微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)和科(ke)學(xue)研究領域(yu)。例如：
　　4.1 試劑(ji)盒，培養基(ji)等手(shou)段
　　抗(kang)幹擾培養基(ji)和微(wei)生(sheng)物數(shu)量(liang)快(kuai)速檢(jian)測(ce)技術(shu)結(jie)合解(jie)決了(le)傳(chuan)統微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)手段不(bu)能解決的難題(ti)，為(wei)建立壹套(tao)完整(zheng)的抗幹擾微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)系統奠(dian)定(ding)了(le)堅實(shi)的基(ji)礎(chu)。如：抗幹(gan)擾(rao)微(wei)生(sheng)物培養基(ji)，新型(xing)生(sheng)化(hua)鑒定管，微(wei)生(sheng)物計(ji)數(shu)卡(ka)，環境(jing)質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒等，可(ke)方(fang)便的用於多項檢(jian)測(ce)。
　　4.2 借助(zhu)新型(xing)儀器(qi)
　　BACTOMETER全(quan)自動(dong)各(ge)類總菌(jun)數(shu)及(ji)快(kuai)速細(xi)菌檢(jian)測(ce)系統可(ke)以(yi)數(shu)小(xiao)時(shi)內獲(huo)得監(jian)測(ce)結(jie)果，樣本(ben)顏(yan)色(se)及光學(xue)特征都不影響(xiang)讀(du)數(shu)，對(dui)酵(jiao)母(mu)和(he)黴菌檢(jian)測(ce)同(tong)樣高(gao)度(du)敏感(gan)原理是利用(yong)電阻抗法(fa)（Impedance Technology）將(jiang)待測(ce)樣本(ben)與培養基(ji)置於(yu)反(fan)應(ying)試劑(ji)盒內(nei)，底(di)部有(you)壹(yi)對(dui)不(bu)銹鋼(gang)電極(ji)，測(ce)定因(yin)微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)而(er)產(chan)生(sheng)阻抗改(gai)變。如微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)時(shi)可(ke)將(jiang)培養基(ji)中(zhong)的大分(fen)子營養物經代(dai)謝轉(zhuan)變(bian)為(wei)活躍(yue)小(xiao)分(fen)子，電阻抗法(fa)可(ke)測(ce)試這種(zhong)微(wei)弱(ruo)變化(hua)，從而(er)比傳統平(ping)板法(fa)更快(kuai)速監(jian)測(ce)微(wei)生(sheng)物的存在及數(shu)量(liang)。測(ce)定項(xiang)目(mu)包括總生(sheng)菌數(shu)，酵(jiao)母(mu)菌(jun)，大腸(chang)桿(gan)菌(jun)群(qun)，黴菌，乳(ru)酸菌(jun)，嗜熱(re)菌(jun)，革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)，金黃(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌等。
　　微(wei)生(sheng)物OD值是反映菌體生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態的壹個指標，OD是Optical Density（光密度(du)）的縮寫(xie)，表示被(bei)檢(jian)測(ce)物吸(xi)收掉的光密度(du)。通(tong)常400～700 nm 都是微(wei)生(sheng)物測(ce)定的範(fan)圍(wei)，需(xu)要(yao)紫外分(fen)光光度(du)計測(ce)大吸(xi)收波(bo)長(chang)。用(yong)得多的是：505 nm測(ce)菌絲(si)菌體(ti)、560 nm測(ce)酵母(mu)、600 nm測(ce)細菌(jun)。用測(ce)OD方法(fa)畫微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)曲(qu)線時(shi)，同(tong)壹株(zhu)菌的起(qi)始培養濃度(du)可(ke)以(yi)準備(bei)多管（根據檢(jian)測(ce)點的需(xu)要(yao)，如需(xu)檢(jian)測(ce)10個點，就準備(bei)10管），然後(hou)每(mei)個(ge)點取壹管出來測(ce)OD值就行了(le)。
　　壹般(ban)測(ce)菌體(ti)密度(du)的OD的波長(chang)範(fan)圍(wei)是580 nm-660 nm，如枯草芽孢桿菌用600 nm，已(yi)經屬於可(ke)見光區（200 nm～400 nm為(wei)紫外光區，400 nm～800 nm為(wei)可(ke)見光區）。空白(bai)如用水做(zuo)，需(xu)要(yao)離心洗(xi)滌菌體(ti)；空白(bai)如用不(bu)接種(zhong)的培養基(ji)做就(jiu)不(bu)需(xu)要(yao)洗(xi)滌，但是不接種(zhong)的培養基(ji)要(yao)和(he)接種(zhong)的同(tong)時(shi)培養以(yi)求(qiu)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，後註意壹般(ban)OD值在控(kong)制(zhi)在(zai)0.1~0.4好(hao)，在這個(ge)區內的值就可(ke)靠(kao)，如果OD大(da)於1.0，壹(yi)般(ban)要(yao)稀(xi)釋(shi)後(hou)再(zai)測(ce)，因為(wei)OD太大，分(fen)光光度(du)計的靈敏(min)度(du)就會(hui)顯(xian)著(zhu)降(jiang)低(di)。
　　壹(yi)般(ban)都測(ce)吸光值，而且好是整(zheng)個(ge)實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)，保(bao)持發酵(jiao)液(ye)或(huo)菌體的稀釋倍數(shu)壹(yi)致(zhi)，吸(xi)光值與稀釋(shi)倍數(shu)不(bu)成(cheng)正比，可(ke)保(bao)證(zheng)整(zheng)個(ge)實(shi)驗(yan)點有(you)可(ke)比性(xing)。且取值的時(shi)候要(yao)連(lian)續(xu)讀(du)數(shu)，重復3次的數(shu)好(hao)。
　　另，用(yong)分(fen)光光度(du)計測(ce)微(wei)生(sheng)物的OD值為(wei)什麽(me)要(yao)把(ba)波(bo)長(chang)設為(wei)600 nm
　　這個(ge)波(bo)長(chang)其實(shi)只(zhi)是針對(dui)濁度(du)，而分(fen)光光度(du)計在(zai)600 nm處對(dui)濁度(du)的反應(ying)比較靈敏(min)。測(ce)吸收(shou)峰(feng)的實(shi)際意(yi)義並(bing)不大(da)，比如LB搖(yao)瓶培養過(guo)夜的大腸(chang)桿(gan)菌(jun)，其實(shi)在400多納米處(chu)的吸收大，但(dan)那(na)很可(ke)能(neng)是培養液的吸收峰(feng)。