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實(shi)驗(yan)室對組織(zhi)細(xi)胞(bao)的破碎(sui)方法很(hen)多,有(you)機械(xie)方法、物(wu)理方法、化學方法和生(sheng)物化學方法等(deng)。
在破碎(sui)前,材料常(chang)需(xu)要(yao)預(yu)處理,如動物材料要(yao)除(chu)去(qu)與實(shi)驗(yan)無關甚至有(you)妨(fang)礙的結締組織(zhi),脂(zhi)肪(fang)組(zu)織(zhi)和血汙等,植(zhi)物種(zhong)子需(xu)要除(chu)殼(ke),微(wei)生(sheng)物材料需(xu)將(jiang)菌體和發酵液(ye)成(cheng)分分開等(deng)。不(bu)同(tong)實(shi)驗(yan)規(gui)模、不(bu)同(tong)實(shi)驗(yan)材料和實(shi)驗(yan)要求,使用的破碎(sui)方法和條(tiao)件也不(bu)同(tong)。壹(yi)些(xie)堅韌(ren)組織(zhi),如(ru)肌(ji)肉(rou)、植(zhi)物(wu)的根(gen)莖等,常(chang)需(xu)要(yao)強烈(lie)的攪(jiao)拌或研(yan)磨作用,才能(neng)把其組織(zhi)細(xi)胞(bao)破壞。而比(bi)較柔(rou)軟的組(zu)織(zhi)如(ru)肝(gan)、腦等(deng),用(yong)普(pu)通的玻璃勻漿器(qi)即(ji)可(ke)達(da)到(dao)破壞細胞(bao)的目的。對同壹實(shi)驗(yan)材料,由(you)於實(shi)驗(yan)目的(要(yao)求)的不(bu)同(tong),采用(yong)的破碎(sui)方式也存在yi定(ding)差(cha)異,如(ru)提(ti)取中的核(he)酸和提(ti)取其中(zhong)的核(he)苷(gan)酸,前(qian)者(zhe)保持溫(wen)和的條(tiao)件,以(yi)保持分(fen)子的完整性;後者(zhe)可(ke)采用(yong)強烈(lie)手(shou)段(duan)。
1. 機械(xie)法
主(zhu)要通(tong)過(guo)機械(xie)切(qie)力(li)的作用使組織(zhi)細(xi)胞(bao)破碎(sui)的方法,常(chang)用(yong)的器(qi)械(xie)有(you)組織(zhi)搗(dao)碎(sui)機、勻(yun)漿器(qi)、研(yan)缽(bo)和研(yan)磨、壓(ya)榨器(qi)等(deng)。
1)組(zu)織(zhi)搗(dao)碎(sui)機 壹(yi)般用於動物組(zu)織(zhi)、植(zhi)物(wu)肉(rou)質種(zhong)子、柔(rou)嫩的葉(ye)芽(ya)等(deng),轉(zhuan)速可(ke)高達(da)10000rpm/M以(yi)上。由(you)於旋(xuan)轉(zhuan)刀(dao)片(pian)的機(ji)械(xie)切(qie)力(li)很(hen)大(da),制備壹些(xie)較(jiao)大(da)分(fen)子(zi)如核酸(suan)則很(hen)少(shao)使用。
2)勻漿器(qi) 勻(yun)漿器(qi)的研(yan)缽(bo)磨球和玻璃管內(nei)壁之間間隙(xi)保持在(zai)之幾毫(hao)米距離,破碎(sui)細胞(bao)的程(cheng)度(du)比(bi)組織(zhi)搗(dao)碎(sui)機高。制作勻漿器(qi)的材料,除(chu)玻璃外,還可(ke)以(yi)用(yong)硬(ying)質塑(su)料、不(bu)銹(xiu)鋼(gang)、人(ren)造(zao)熒光(guang)樹脂(zhi)等(deng)。
3)研(yan)缽(bo) 多用(yong)於細菌或其他堅硬(ying)植(zhi)物材料,研(yan)磨時(shi)常(chang)加(jia)入(ru)少(shao)量(liang)石(shi)英(ying)砂,玻璃粉(fen)或其他研(yan)磨劑(ji),以(yi)提(ti)高研(yan)磨效果(guo)。
4)細(xi)菌磨 是(shi)壹種(zhong)改良(liang)了(le)的研(yan)磨器(qi),比(bi)研(yan)缽(bo)具(ju)有(you)更大(da)的研(yan)磨面積(ji),而且(qie)低(di)部有(you)出口(kou)。操作時(shi)先(xian)把細菌和研(yan)磨粉(fen)調(tiao)成糊(hu)狀,每(mei)次(ci)加入(ru)壹小(xiao)勺,研(yan)磨20-30秒即(ji)可(ke)將(jiang)細(xi)菌細胞(bao)磨碎(sui)。
2. 物理法
主(zhu)要通(tong)過(guo)各(ge)種(zhong)物理因素(su)使組織(zhi)細(xi)胞(bao)破碎(sui)的方法。在(zai)生(sheng)化制備(bei)中(zhong)常(chang)用(yong)的方法有(you):
1)反復(fu)凍溶(rong)法 先(xian)將(jiang)樣品(pin)深冷(leng)至-15---20度(du)使之凍固(gu),再(zai)緩慢的融(rong)化,反復(fu)多次(ci),多用(yong)於動物性(xing)材料。
2)急(ji)熱(re)驟冷(leng)法 將(jiang)材料投(tou)入(ru)沸(fei)水中(zhong),維持85-90分(fen)鐘,至水(shui)浴中急(ji)速冷卻,此(ci)法可(ke)用(yong)於細菌及病(bing)毒(du)材料。
3)超聲波(bo)處(chu)理 頻(pin)率(lv)壹般選在10KC至200KC,功(gong)率(lv)200-500瓦範(fan)圍(wei),處理時(shi)間有(you)數分(fen)鐘至數鐘不(bu)等(deng),處(chu)理過程中註(zhu)意(yi)冷(leng)卻。此(ci)法多用(yong)於微(wei)生(sheng)物材料。
3.化學及生(sheng)物化學法
有(you)自溶(rong)法,酶解法和表面(mian)活性(xing)劑(ji)法等(deng)。
微(wei)信掃(sao)壹掃(sao)