二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱無汙染(ran)控制技術(shu)

二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱無汙染(ran)控制技術(shu)

    二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱是(shi)通過在(zai)培(pei)養(yang)箱箱(xiang)體(ti)內(nei)模擬形(xing)成壹(yi)個類似(si)細(xi)胞/組(zu)織(zhi)在(zai)生物體(ti)內(nei)的生長環(huan)境(jing)如(ru)穩(wen)定(ding)的溫(wen)度（37°C）、穩(wen)定(ding)的CO2水平（5%）、恒(heng)定(ding)的酸堿(jian)度（pH值(zhi)：7.2-7.4）、較高的相對濕度（95%），來對細(xi)胞(bao)/組(zu)織(zhi)進行體(ti)外(wai)培養(yang)的壹(yi)種(zhong)裝(zhuang)置。 廣泛(fan)應用(yong)於(yu)細(xi)胞、組(zu)織(zhi)培養(yang)和(he)某些(xie)特殊微(wei)生物的(de)培養(yang)，常見於(yu)細(xi)胞動力學研(yan)究(jiu)、哺(bu)乳(ru)動物細(xi)胞分(fen)泌物的(de)收集(ji)、各種(zhong)物理(li)、化學(xue)因素(su)的(de)致癌(ai)或(huo)毒理效應、抗(kang)原(yuan)的(de)研(yan)究(jiu)和(he)生產、培養(yang)雜交(jiao)瘤(liu)細胞(bao)生產抗(kang)體(ti)、體(ti)外(wai)授精（IVF）、幹細胞、組(zu)織(zhi)工程、藥物篩(shai)選(xuan)等研(yan)究(jiu)領(ling)域(yu)。 
 在(zai)生物活(huo)體(ti)內(nei)，生物體(ti)有自身(shen)的(de)免(mian)疫(yi)系統保護(hu)細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)，但是(shi)在(zai)體(ti)外(wai)培養(yang)時，沒(mei)有任何(he)保護(hu)自己的(de)免疫(yi)屏障。對於(yu)二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱的(de)基本參數溫(wen)度、CO2 和(he)濕度，大(da)多數培(pei)養(yang)箱都(dou)能滿(man)足研(yan)究(jiu)實(shi)驗(yan)的需要(yao)。然而(er)，針(zhen)對培(pei)養(yang)過程中面臨的(de)各種(zhong)汙(wu)染(ran)源，各(ge)品牌(pai)二(er)氧(yang)培養(yang)箱的(de)控制方式(shi)和(he)效果(guo)不(bu)盡相(xiang)同(tong)，因此(ci)細胞(bao)體(ti)外(wai)培養(yang)中*的威脅(xie)實(shi)際(ji)上(shang)是(shi)汙(wu)染(ran)問題。 
 二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱中的主要(yao)汙染(ran)源：細(xi)菌、真(zhen)菌（黴(mei)菌和(he)酵母菌）、病(bing)毒、支原(yuan)體(ti)、非同(tong)種細(xi)胞。 
      對於(yu)細(xi)胞來說，理(li)想的(de)培(pei)養(yang)環境(jing)同(tong)樣(yang)也(ye)適合(he)這(zhe)些(xie)汙(wu)染(ran)物的(de)生存(cun)，培(pei)養(yang)箱本身(shen)是(shi)不(bu)會(hui)辨(bian)別(bie)的(de)，而(er)細胞(bao)培(pei)養(yang)中大部分(fen)時間(jian)裏細胞(bao)都(dou)是位(wei)於(yu)培(pei)養(yang)箱內(nei)，因此(ci)箱體(ti)內(nei)能否(fou)抑(yi)菌或(huo)滅(mie)菌關鍵(jian)！ 
      細菌：細(xi)菌汙(wu)染(ran)後，培養(yang)基1-2天(tian)就會(hui)變色(se)，對細(xi)胞(bao)生長影(ying)響(xiang)明(ming)顯，應迅(xun)速將汙染(ran)細胞(bao)與其(qi)它(ta)細胞(bao)系隔(ge)離(li)，滅(mie)菌後丟(diu)棄(qi)，還要(yao)用實驗(yan)室消毒劑消毒培養(yang)器皿(min)和(he)超凈臺(tai)。 
      病(bing)毒：由(you)於(yu)病(bing)毒寄(ji)生生存(cun)，爆發後盡快和(he)正(zheng)常(chang)細(xi)胞(bao)隔(ge)離(li)，丟(diu)棄(qi)處理，相對來說容易(yi)處(chu)理(li)，對操作者(zhe)威脅(xie)較大；盡管病(bing)毒汙染(ran)的細(xi)胞不(bu)影響原代(dai)培(pei)養(yang)，但生產疫(yi)苗是(shi)不(bu)安全(quan)的。因(yin)此(ci)，潛(qian)在(zai)病(bing)毒是細(xi)胞大(da)量生產和(he)疫(yi)苗、幹擾(rao)素(su)等生物制品制作中的難題。
真菌（黴(mei)菌和(he)酵母菌）：真(zhen)菌生長的(de)比(bi)較慢，不(bu)象細菌那(na)麽容易(yi)被(bei)發(fa)現，但是(shi)壹(yi)旦發(fa)現(xian)有它(ta)的存(cun)在(zai)細(xi)胞(bao)就(jiu)被汙(wu)染(ran)了；目前沒有好的(de)抑(yi)制方法，包括(kuo)現(xian)在(zai)常(chang)用(yong)的(de)兩性(xing)黴素，壹(yi)旦汙(wu)染(ran)容易(yi)反復爆發，尤其(qi)孢(bao)子很(hen)難(nan)殺滅(mie)。 
支(zhi)原(yuan)體(ti)：支原(yuan)體(ti)汙染(ran)後，因為(wei)它(ta)們(men)不(bu)會(hui)使(shi)細(xi)胞(bao)死亡可以(yi)與細胞長期共存(cun)，培(pei)養(yang)基壹(yi)般(ban)不發生渾(hun)濁(zhuo)，細胞無明(ming)顯變化，外(wai)觀上(shang)給(gei)人以(yi)正(zheng)常(chang)感(gan)覺，實則(ze)細胞已經(jing)受到(dao)多方(fang)面潛在(zai)影(ying)響(xiang)，如(ru)引(yin)起(qi)細胞(bao)變形(xing)，影響(xiang)DNA合(he)成，抑(yi)制細胞生長等，往(wang)往(wang)被大(da)多數實(shi)驗(yan)者(zhe)忽(hu)視(shi)。 
非(fei)同(tong)種細(xi)胞：即(ji)細(xi)胞交(jiao)叉汙(wu)染(ran)，由(you)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)操作時各(ge)細胞(bao)株(zhu)所(suo)需的(de)器材(cai)和(he)溶液(ye)沒有嚴格(ge)分(fen)開，往(wang)往(wang)會(hui)使(shi)壹(yi)種(zhong)細(xi)胞被(bei)另(ling)壹(yi)種(zhong)細(xi)胞汙(wu)染(ran)。目前，世界(jie)上(shang)已有幾(ji)十(shi)種(zhong)細胞(bao)都(dou)被(bei)HeLa細胞所(suo)汙染(ran)，致使(shi)許(xu)多實(shi)驗(yan)宣(xuan)告(gao)無效。
因此(ci)，以(yi)上(shang)汙(wu)染(ran)壹(yi)旦發(fa)生，細胞(bao)*後基本只能丟(diu)棄(qi)，實驗無法挽(wan)救(jiu)，對於(yu)許(xu)多取(qu)樣(yang)困(kun)難的實驗損失無法估(gu)量！ 
 目前，二(er)氧(yang)化碳培(pei)養(yang)箱的(de)滅(mie)菌技術(shu)主要(yao)有幹熱(re)、濕熱(re)、紫(zi)外(wai)燈照(zhao)射、消毒劑擦(ca)拭(shi)等。 
 高溫(wen)幹熱(re)空氣(qi)滅(mie)菌是(shi)目前的*有效的滅(mie)菌技術(shu)，能消滅(mie)所(suo)有微(wei)生物汙(wu)染(ran)源（包括(kuo)耐高溫(wen)的(de)芽(ya)孢桿(gan)菌）；濕熱(re)滅(mie)菌通(tong)常用(yong)於(yu)高壓蒸(zheng)汽滅(mie)菌中，比較少用在(zai)CO2培(pei)養(yang)箱上(shang)，濕熱(re)滅(mie)菌在(zai)常(chang)壓下(xia)又叫煮沸(fei)法，煮沸(fei)的(de)水溫(wen)壹(yi)般(ban)至(zhi)少需(xu)為(wei)100℃，細(xi)菌繁(fan)殖(zhi)體(ti)煮沸(fei)5分(fen)鐘被殺死，但芽(ya)胞常(chang)需(xu)煮沸(fei)2小(xiao)時以(yi)上(shang)才(cai)可(ke)被殺死；紫(zi)外(wai)燈照(zhao)射法的(de)有效性受很(hen)多因(yin)素(su)影(ying)響，如(ru)遮(zhe)擋、時間(jian)、強度、照(zhao)射距離(li)，濕度等，滅(mie)菌效果(guo)很(hen)難(nan)保證；消毒劑擦(ca)拭(shi)法是(shi)對表(biao)面滅(mie)菌的(de)方法，適合(he)於(yu)平(ping)整(zheng)的(de)表(biao)面如(ru)實(shi)驗臺(tai)面，而(er)箱體(ti)內(nei)部設(she)計的(de)死角、各種(zhong)器件因無法擦(ca)拭(shi)等因素(su)導致滅(mie)菌效果(guo)也(ye)很(hen)有限，而(er)且(qie)含(han)氯、碘(dian)的(de)消毒劑對於(yu)不(bu)銹鋼(gang)有腐蝕作用(yong)，不能對不(bu)銹(xiu)鋼箱(xiang)體(ti)進行擦拭滅(mie)菌。