使(shi)用(yong)細胞(bao)計數器(qi)的三(san)個(ge)tip

 使(shi)用(yong)細胞(bao)計數器(qi)的三(san)個(ge)tip

市(shi)場(chang)上近(jin)幾年(nian)湧(yong)現(xian)出不少自動細胞(bao)計數器(qi)。這種(zhong)儀(yi)器(qi)利(li)用(yong)光(guang)學顯微鏡(jing)技(ji)術(shu)，但帶(dai)來(lai)了(le)更(geng)高的準確性、重(zhong)復性(xing)，並將(jiang)這壹(yi)單調的(de)工作(zuo)自動化(hua)。樣品(pin)體積(ji)小(xiao)也(ye)是這種(zhong)細胞(bao)計數器(qi)的額(e)外優勢(shi)。許多儀(yi)器(qi)使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)的(de)玻(bo)片(pian)，只需要(yao)10-20 uL樣品(pin)。將(jiang)玻片(pian)插(cha)入(ru)自動細胞(bao)計數器(qi)中，照相機(ji)捕(bu)獲圖像。隨(sui)後(hou)內(nei)置的(de)軟(ruan)件(jian)分(fen)析圖(tu)像，顯示(shi)細胞(bao)數量(liang)等(deng)信(xin)息(xi)。
在此(ci)，專(zhuan)家介(jie)紹(shao)了(le)使(shi)用(yong)自動細胞(bao)計數器(qi)的三(san)個(ge)tip。
準確對(dui)焦
與其(qi)他(ta)光(guang)學顯微鏡(jing)壹(yi)樣，儀(yi)器(qi)的準確對(dui)焦對(dui)於計數很關(guan)鍵。在手動計數時(shi)，訓練(lian)有素(su)的大(da)腦(nao)可(ke)輕松(song)鑒定(ding)細胞(bao)。然而，自動細胞(bao)計數器(qi)內的照(zhao)相機(ji)檢測活(huo)細胞(bao)的亮(liang)中心(xin)和暗(an)邊(bian)緣(yuan)，將(jiang)其(qi)處(chu)理(li)成黑白(bai)像素信(xin)息(xi)。如果(guo)細胞(bao)未(wei)準確對(dui)焦，那麽(me)亮(liang)中心(xin)將(jiang)有明顯的灰度，會被(bei)誤(wu)認為(wei)是(shi)死(si)細胞(bao)。
大部分(fen)研(yan)究人(ren)員(yuan)將(jiang)會發(fa)現對(dui)焦並不難，只要顯示(shi)在屏幕(mu)上(shang)的圖像質(zhi)量(liang)與(yu)傳統的(de)顯微鏡(jing)相似(si)。確保妳(ni)有壹(yi)張清(qing)晰的圖(tu)像，這很重要(yao)。另(ling)壹點(dian)是要(yao)了(le)解細胞(bao)計數器(qi)中照相機(ji)的(de)分(fen)辨率(lv)。如果(guo)自動細胞(bao)計數器(qi)以低(di)的幀速(su)顯示(shi)，如每(mei)秒(miao)小(xiao)於15幀，那(na)麽(me)顯示(shi)的圖(tu)像將(jiang)不能實時(shi)響應(ying)聚焦(jiao)旋(xuan)鈕的(de)微(wei)調(tiao)。
控(kong)制(zhi)玻片(pian)之(zhi)間(jian)的(de)差(cha)異
大(da)部分(fen)基於圖像的自動細胞(bao)計數器(qi)都(dou)使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)的(de)玻(bo)片(pian)，其(qi)上(shang)有明確的測(ce)量(liang)區(qu)域。這壹(yi)測量(liang)區(qu)域被(bei)物鏡(jing)的(de)放大率(lv)和照(zhao)相機(ji)的(de)圖(tu)像傳感(gan)器(qi)大小(xiao)所(suo)設定(ding)。這些(xie)細胞(bao)計數器(qi)通常測(ce)定(ding)0.4-0.5 uL樣(yang)品(pin)，相當(dang)於血球(qiu)計數器(qi)的4-5個(ge)大方(fang)格(ge)。
與(yu)血(xue)球(qiu)計數器(qi)不同，計數玻(bo)片(pian)通常只使(shi)用(yong)壹次(ci)。因此(ci)，玻(bo)片之間(jian)的(de)差(cha)異會(hui)顯著影響細胞(bao)計數的(de)結(jie)果(guo)。對(dui)於某壹組實驗(yan)，好使(shi)用(yong)同壹批(pi)號(hao)的玻(bo)片，盡(jin)量(liang)避(bi)免這些(xie)差(cha)異。在(zai)更(geng)換(huan)批(pi)號(hao)時(shi)，也(ye)建(jian)議用(yong)標(biao)準的微(wei)珠來(lai)檢驗玻(bo)片(pian)。大部分(fen)細胞(bao)計數器(qi)制造(zao)商(shang)都(dou)提(ti)供已(yi)知濃(nong)度的(de)標(biao)準微珠(zhu)。使(shi)用(yong)相同的微珠(zhu)樣品(pin)來檢驗不同的玻片(pian)，將(jiang)有助(zhu)於發(fa)現差(cha)異。
評(ping)估(gu)軟(ruan)件(jian)的分(fen)簇(cu)性(xing)能(neng)
自動細胞(bao)計數器(qi)的核(he)心(xin)是(shi)開展分(fen)析的(de)軟(ruan)件(jian)，它相當(dang)於手動計數時(shi)的(de)人腦。大(da)部分(fen)的自動細胞(bao)計數器(qi)包(bao)含(han)集(ji)成(cheng)軟(ruan)件(jian)，能準確地計算單(dan)細胞(bao)群(qun)體(ti)的(de)數(shu)量(liang)。然而，在(zai)談到成簇(cu)細胞(bao)的計數時(shi)，細胞(bao)計數器(qi)就會存(cun)在(zai)明顯差(cha)異。由於從培(pei)養細胞(bao)中獲得(de)的樣(yang)品(pin)並不總是(shi)單(dan)細胞(bao)群(qun)體(ti)，因此(ci)，有時(shi)會(hui)有多個(ge)細胞(bao)團(tuan)塊，而自動細胞(bao)計數器(qi)的分(fen)簇(cu)（declustering）性(xing)能(neng)也(ye)仔(zai)細評(ping)估(gu)。評(ping)估(gu)分(fen)簇(cu)性(xing)能(neng)時(shi)可(ke)開展圖(tu)1的檢測。
圖(tu)1. 將(jiang)HL-60細胞(bao)加熱(re)到(dao)70°C，處(chu)理(li)20分(fen)鐘，殺死(si)細胞(bao)，獲得(de)死(si)細胞(bao)樣品(pin)。隨(sui)後(hou)利(li)用(yong)兩款(kuan)不同的自動細胞(bao)計數器(qi)進行(xing)樣品(pin)的檢測。在(zai)細胞(bao)計數之(zhi)後(hou)，根據軟(ruan)件(jian)捕獲的圖(tu)像進行(xing)比(bi)較。紅色(se)圓圈：死(si)細胞(bao)；藍色(se)圓圈：活(huo)細胞(bao)；黑色圓圈：排除的(de)對(dui)象。
自動細胞(bao)計數器(qi)正在取(qu)代(dai)單調乏味(wei)的(de)手動計數方(fang)法(fa)。隨(sui)著(zhe)對(dui)壹些(xie)基(ji)本(ben)原理(li)的了(le)解，自動細胞(bao)計數器(qi)將(jiang)幫助(zhu)妳(ni)獲得(de)佳(jia)的(de)結果(guo)。