細(xi)胞分類(lei)計(ji)數(shu)器(qi)原理

 細(xi)胞分類(lei)計(ji)數(shu)器(qi)原理

細(xi)胞培(pei)養(yang)技(ji)術(shu)中，細(xi)胞計(ji)數(shu)是(shi)壹(yi)項(xiang)基(ji)本功(gong)，對於(yu)標(biao)準化(hua)培養(yang)條件以及需(xu)要(yao)定量(liang)的實(shi)驗(yan)來(lai)說(shuo)都(dou)關(guan)鍵。這(zhe)裏介(jie)紹(shao)使用血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數(shu)的經典(dian)方法(fa)以及中間(jian)壹(yi)些需(xu)要(yao)註意(yi)的細(xi)節。
制備(bei)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)：
對於(yu)貼(tie)壁生長的細(xi)胞，我(wo)們需(xu)要(yao)使用胰酶(mei)消(xiao)化(hua)的方法(fa)使細(xi)胞從培(pei)養(yang)皿表面(mian)脫落(luo)
根據(ju)需(xu)要(yao)加(jia)入(ru)合適體(ti)積的培養(yang)基(ji)，將(jiang)細(xi)胞進(jin)行中和(he)及稀釋(shi)，以(yi)得到(dao)均(jun)質(zhi)的細(xi)胞懸(xuan)液(ye)。要(yao)求盡(jin)可(ke)能將(jiang)細(xi)胞吹打散(san)開(kai)，不(bu)要(yao)殘留(liu)任(ren)何細(xi)胞團(tuan)
準備(bei)血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)：
使用70%乙醇將(jiang)蓋玻(bo)片和(he)血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)清潔幹(gan)凈
將(jiang)將(jiang)蓋玻(bo)片潤(run)濕(shi)（使用水(shui)或(huo)呼(hu)壹口(kou)氣(qi)，目的是使蓋玻片與血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)接觸更(geng)緊密(mi)，易於(yu)粘連），並覆(fu)蓋至血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)上(shang)
臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染(ran)色(se)（可(ke)選）：
如(ru)果需(xu)要(yao)計(ji)算細(xi)胞的活力(li)，則需(xu)要(yao)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)和0.4%臺盼蘭(lan)等(deng)體積混合
室(shi)溫(wen)孵(fu)育3-5分鐘，使臺盼蘭(lan)進(jin)入死(si)細(xi)胞，使死(si)細(xi)胞著(zhe)藍色(se)
血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)加(jia)樣：
使用吸(xi)管將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或細(xi)胞/臺(tai)盼蘭(lan)混合液滴(di)加(jia)到(dao)血(xue)細(xi)胞計(ji)數(shu)器(qi)計(ji)數(shu)池的邊(bian)緣。此時液滴(di)將(jiang)在虹吸(xi)的作(zuo)用下(xia)進(jin)入蓋(gai)玻片(pian)下(xia)方(fang)的計(ji)數(shu)池
以(yi)同樣的方式(shi)在(zai)另(ling)壹(yi)側(ce)的計(ji)數(shu)池中也(ye)加(jia)入(ru)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)
將(jiang)計(ji)數(shu)板放置幾分鐘使細(xi)胞擴散，同時(shi)用吸(xi)水(shui)紙(zhi)吸(xi)除多(duo)余(yu)的液體(ti)
細(xi)胞計(ji)數(shu)：
在(zai)100倍(bei)顯微鏡(jing)下(xia)，移(yi)動(dong)計(ji)數(shu)板將(jiang)視(shi)野(ye)對準計(ji)數(shu)板的中央(yang)大(da)方塊(kuai)，該(gai)方(fang)塊(kuai)四(si)周(zhou)有(you)壹(yi)圈(quan)3條平行線包圍，中間(jian)有(you)密(mi)集(ji)的網(wang)格(ge)。中央(yang)方塊區(qu)差(cha)不(bu)多(duo)剛(gang)好(hao)可(ke)以填(tian)滿(man)整個視(shi)野(ye)
使用手持(chi)式(shi)計(ji)數(shu)器(qi)記(ji)錄(lu)計(ji)數(shu)池四(si)個角(jiao)以(yi)及中央(yang)方塊內(nei)的細(xi)胞數(shu)（1-5號位(wei)置，經典(dian)的current-protocol推薦(jian)每(mei)個方(fang)塊(kuai)細(xi)胞數(shu)應不(bu)大(da)於(yu)20-50），並(bing)重復(fu)記(ji)錄(lu)另(ling)壹(yi)側(ce)計(ji)數(shu)池中的細(xi)胞數(shu)，總計(ji)十個方(fang)塊(kuai)。計(ji)數(shu)的方法(fa)是(shi)只計(ji)算上(shang)邊(bian)和(he)左邊(bian)壓(ya)線的細(xi)胞，而(er)右(you)邊(bian)和(he)下(xia)邊(bian)壓(ya)線的細(xi)胞不(bu)予計(ji)算（下(xia)圖，總體(ti)原則是(shi)“計(ji)上(shang)不(bu)計(ji)下(xia)，計(ji)左不(bu)計(ji)右(you)"，判斷標(biao)準為(wei)是否(fou)接觸三條邊(bian)線的中間(jian)線）。如(ru)果有(you)多(duo)個細(xi)胞沒(mei)有(you)吹散成(cheng)團存(cun)在(zai)，此時只可記(ji)為(wei)壹個細(xi)胞。如(ru)果團(tuan)塊很多(duo)，則(ze)可(ke)能需(xu)要(yao)重新吹打甚(shen)至消(xiao)化(hua)直(zhi)至絕大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞為(wei)單個細(xi)胞