血細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)原(yuan)理

血(xue)細(xi)胞計數原(yuan)理

細胞(bao)培(pei)養(yang)技術(shu)中，細胞(bao)計(ji)數是壹項(xiang)基(ji)本功(gong)，對(dui)於標(biao)準化培養(yang)條件(jian)以及需(xu)要定(ding)量的(de)實(shi)驗(yan)來說都(dou)關(guan)鍵。這(zhe)裏介(jie)紹使(shi)用(yong)血(xue)細(xi)胞計數(shu)器(qi)對(dui)細胞(bao)進行計(ji)數的(de)經(jing)典方(fang)法(fa)以及中間壹些需(xu)要註意的(de)細(xi)節(jie)。
制(zhi)備細胞懸(xuan)液(ye)：
對(dui)於貼壁生長(chang)的(de)細(xi)胞(bao)，我(wo)們(men)需(xu)要使用(yong)胰(yi)酶消(xiao)化的(de)方(fang)法(fa)使細胞(bao)從(cong)培養(yang)皿表面脫落
根據(ju)需(xu)要加入合適體(ti)積(ji)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，將細胞(bao)進行中和及稀釋(shi)，以得到均質(zhi)的(de)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)。要求盡可能(neng)將細(xi)胞吹打(da)散(san)開，不(bu)要殘留任(ren)何細胞(bao)團
準備血細胞(bao)計數(shu)器(qi)：
使用(yong)70%乙(yi)醇將蓋玻(bo)片(pian)和血(xue)細胞(bao)計數器(qi)清潔幹凈(jing)
將將(jiang)蓋(gai)玻(bo)片(pian)潤濕（使(shi)用(yong)水或呼壹口氣(qi)，目(mu)的(de)是使蓋玻片(pian)與血(xue)細胞(bao)計數器(qi)接(jie)觸更(geng)緊(jin)密(mi)，易於粘連(lian)），並覆蓋(gai)至(zhi)血細胞(bao)計數器(qi)上
臺(tai)盼蘭(lan)染(ran)色(se)（可選(xuan)）：
如(ru)果需(xu)要計算(suan)細胞(bao)的(de)活(huo)力，則需(xu)要將細胞懸液(ye)和(he)0.4%臺(tai)盼(pan)蘭(lan)等(deng)體(ti)積(ji)混(hun)合
室(shi)溫(wen)孵(fu)育(yu)3-5分鐘(zhong)，使臺(tai)盼蘭(lan)進入死細(xi)胞，使死細(xi)胞著藍色(se)
血細(xi)胞(bao)計(ji)數器(qi)加樣(yang)：
使(shi)用(yong)吸(xi)管(guan)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或細(xi)胞/臺盼(pan)蘭(lan)混(hun)合液(ye)滴(di)加到血細胞(bao)計(ji)數(shu)器(qi)計數(shu)池的(de)邊(bian)緣(yuan)。此(ci)時(shi)液(ye)滴(di)將在虹吸(xi)的(de)作(zuo)用(yong)下進入蓋玻片(pian)下方(fang)的(de)計(ji)數(shu)池
以同樣(yang)的(de)方(fang)式(shi)在另(ling)壹側的(de)計(ji)數(shu)池中也加入細胞懸液(ye)
將(jiang)計(ji)數(shu)板(ban)放(fang)置幾(ji)分鐘(zhong)使細(xi)胞擴散(san)，同(tong)時用(yong)吸(xi)水紙(zhi)吸(xi)除(chu)多(duo)余的(de)液(ye)體(ti)
細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)：
在100倍(bei)顯(xian)微(wei)鏡下，移動(dong)計(ji)數(shu)板(ban)將(jiang)視(shi)野對(dui)準計數板(ban)的(de)中央(yang)大(da)方(fang)塊(kuai)，該方(fang)塊(kuai)四(si)周(zhou)有(you)壹圈3條平(ping)行線(xian)包圍(wei)，中間有(you)密(mi)集的(de)網(wang)格。中央(yang)方(fang)塊(kuai)區差不(bu)多(duo)剛好可以填滿整(zheng)個視(shi)野
使(shi)用(yong)手(shou)持(chi)式(shi)計數(shu)器(qi)記錄(lu)計數池四(si)個角以及中央(yang)方(fang)塊(kuai)內的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)（1-5號位置，經(jing)典的(de)current-protocol推(tui)薦每個方(fang)塊(kuai)細胞(bao)數應不(bu)大(da)於20-50），並重(zhong)復記(ji)錄(lu)另(ling)壹側計(ji)數(shu)池中的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)，總計十個方(fang)塊(kuai)。計數(shu)的(de)方(fang)法(fa)是只計算(suan)上邊(bian)和(he)左邊(bian)壓線(xian)的(de)細(xi)胞(bao)，而(er)右(you)邊(bian)和(he)下邊(bian)壓線(xian)的(de)細(xi)胞(bao)不(bu)予(yu)計(ji)算(suan)（下圖(tu)，總體(ti)原(yuan)則是“計上不(bu)計(ji)下，計(ji)左不(bu)計(ji)右(you)"，判(pan)斷(duan)標準為是否接(jie)觸三(san)條邊(bian)線(xian)的(de)中間線(xian)）。如(ru)果有(you)多個細胞沒(mei)有(you)吹散(san)成(cheng)團存(cun)在，此時(shi)只(zhi)可記為壹個細胞。如(ru)果團塊(kuai)很(hen)多(duo)，則可能(neng)需(xu)要重新吹打(da)甚(shen)至(zhi)消(xiao)化直(zhi)至(zhi)絕大多數細胞(bao)為單個細胞