微生(sheng)物限(xian)度(du)檢(jian)測(ce)儀(yi)器(qi)的(de)原(yuan)理和應(ying)用(yong)範圍(wei)

　微(wei)生(sheng)物的(de)檢(jian)測(ce)，無(wu)論在理論研究還是在生(sheng)產實(shi)踐中都具有重(zhong)要的意(yi)義(yi)，本(ben)文(wen)對生(sheng)長(chang)量測(ce)定法、微生物計(ji)數(shu)法(fa)、生理指標(biao)法(fa)和商(shang)業化快(kuai)速微(wei)生(sheng)物檢(jian)測(ce)簡(jian)要(yao)介紹了利用(yong)微(wei)生物重(zhong)量(liang)，體積，大小，生理代謝物等(deng)指標(biao)的(de)二(er)十余(yu)種常(chang)用(yong)的檢(jian)測(ce)方法(fa)，簡(jian)要介紹了這些(xie)方法(fa)的(de)原(yuan)理，應(ying)用(yong)範圍(wei)和優(you)缺點。
　　壹個微生(sheng)物細胞(bao)在合(he)適(shi)的(de)外(wai)界(jie)條(tiao)件下(xia)，不(bu)斷的(de)吸收(shou)營(ying)養物質，並按自(zi)己的代(dai)謝方式(shi)進行新(xin)陳代謝。如果(guo)同化作(zuo)用(yong)的速度(du)超過(guo)了異(yi)化(hua)作用(yong)，則(ze)其(qi)原(yuan)生質的總(zong)量（重(zhong)量(liang)，體(ti)積，大小）就不(bu)斷增(zeng)加，於是出(chu)現了個體的(de)生長(chang)現象(xiang)。如(ru)果(guo)這是(shi)壹種平(ping)衡(heng)生長(chang)，即(ji)各細胞(bao)組分(fen)是(shi)按恰(qia)當的(de)比例(li)增(zeng)長(chang)時，則(ze)達(da)到程度後就會發生(sheng)繁(fan)殖，從(cong)而引起(qi)個體數(shu)目(mu)的增(zeng)加，這(zhe)時，原(yuan)有的(de)個體已(yi)經發展(zhan)成壹個群體(ti)。隨(sui)著(zhe)群(qun)體中各個個體的(de)進壹步生長(chang)，就引(yin)起(qi)了這壹群體(ti)的(de)生(sheng)長(chang)，這可(ke)從(cong)其(qi)體(ti)積(ji)、重(zhong)量(liang)、密度或濃(nong)度作(zuo)指標(biao)來(lai)衡(heng)量。微(wei)生物的(de)生(sheng)長(chang)不(bu)同於其(qi)他(ta)生(sheng)物的(de)生(sheng)長(chang)，微生(sheng)物的(de)個體生(sheng)長(chang)在科研上有困(kun)難，通(tong)常(chang)情(qing)況下也(ye)沒有實(shi)際(ji)意(yi)義(yi)。微(wei)生(sheng)物是(shi)以(yi)量(liang)取(qu)勝(sheng)的(de)，因(yin)此(ci)，微生物的(de)生(sheng)長(chang)通(tong)常(chang)指群(qun)體(ti)的擴(kuo)增(zeng)。微生(sheng)物的(de)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖是(shi)其(qi)在內(nei)外(wai)各種(zhong)環(huan)境(jing)因(yin)素(su)相(xiang)互作(zuo)用下(xia)的綜合(he)反(fan)映(ying)。因(yin)此(ci)生長(chang)繁(fan)殖情(qing)況(kuang)就(jiu)可作為研究各種(zhong)生理生化和(he)遺傳(chuan)等問題的(de)重要(yao)指標(biao)，同時，微(wei)生(sheng)物在生(sheng)產實(shi)踐上的各(ge)種應(ying)用(yong)或是(shi)對致(zhi)病(bing)，黴(mei)腐(fu)微(wei)生(sheng)物的(de)防治都和他(ta)們的生(sheng)長(chang)抑制緊(jin)密相(xiang)關。所(suo)以(yi)有必(bi)要介紹壹下微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)情況(kuang)的(de)檢(jian)測(ce)方法(fa)。既(ji)然(ran)生長(chang)意(yi)味(wei)著(zhe)原(yuan)生質含(han)量(liang)的增(zeng)加，所(suo)以(yi)測(ce)定的方法(fa)也(ye)都直(zhi)接(jie)或間(jian)接(jie)的以(yi)次(ci)為根據，而測定繁(fan)殖則(ze)都要建(jian)立(li)在計(ji)數(shu)這(zhe)壹基礎(chu)上。微生(sheng)物生(sheng)長(chang)的衡(heng)量，可(ke)以(yi)從(cong)其(qi)重(zhong)量(liang)，體(ti)積(ji)，密度，濃度(du)，做(zuo)指標(biao)來(lai)進行衡(heng)量。
　　1. 微(wei)生物計(ji)量(liang)法
　　1.1 體積測量(liang)法(fa)
　　又(you)稱測(ce)菌(jun)絲(si)濃(nong)度法，通(tong)過(guo)測定體積培(pei)養液中所(suo)含(han)菌(jun)絲(si)的(de)量來反(fan)映(ying)微(wei)生(sheng)物的(de)生(sheng)長(chang)狀況(kuang)。方法(fa)是(shi)，取(qu)量的(de)待(dai)測(ce)培(pei)養液（如10 mL）放在有刻(ke)度(du)的(de)離(li)心管中，設(she)定的離(li)心時間(jian)（如(ru)5 min）和(he)轉(zhuan)速(su)（如5000 rpm），離(li)心後，倒(dao)出(chu)上清夜(ye)，測出(chu)上清夜(ye)體積為v，則菌(jun)絲(si)濃(nong)度為（10-v）/10。菌(jun)絲(si)濃(nong)度測定法是大規(gui)模工(gong)業發酵(jiao)生產上微生(sheng)物生(sheng)長(chang)的壹個重要(yao)監(jian)測(ce)指標(biao)。這(zhe)種方法(fa)比較(jiao)粗(cu)放，簡便(bian)，快(kuai)速(su)，但(dan)需(xu)要設(she)定壹致的(de)處(chu)理條(tiao)件，否(fou)則(ze)偏(pian)差(cha)很(hen)大，由(you)於離(li)心沈澱(dian)物中夾(jia)雜有壹些(xie)固(gu)體(ti)營(ying)養物，結果(guo)會有偏(pian)差(cha)。
　　稱幹(gan)重(zhong)法
　　可(ke)用離(li)心或過(guo)濾法測定。壹般幹(gan)重(zhong)為濕重的(de)10~20%。在離(li)心法中，將體積待(dai)測(ce)培(pei)養液倒入離(li)心管中，設(she)定的離(li)心時間(jian)和(he)轉(zhuan)速(su)，進行離(li)心，並用(yong)清水離(li)心洗滌1~5次(ci)，進行幹(gan)燥(zao)。幹(gan)燥(zao)可(ke)用(yong)烘箱在105 ℃或100 ℃下(xia)烘幹，或采(cai)用紅(hong)外(wai)線(xian)烘幹，也(ye)可(ke)在80 ℃或40 ℃下(xia)真空幹燥(zao)，幹(gan)燥(zao)後(hou)稱重(zhong)。如(ru)用過(guo)濾法，絲狀真菌(jun)可(ke)用(yong)濾紙(zhi)過(guo)濾，細菌(jun)可(ke)用(yong)醋(cu)酸(suan)纖(xian)維膜等(deng)濾(lv)膜過(guo)濾，過(guo)濾後用少量水(shui)洗滌，在40 ℃下(xia)進行真(zhen)空幹燥(zao)。稱幹(gan)重(zhong)發法(fa)較(jiao)為煩瑣(suo)，通(tong)常(chang)獲(huo)取(qu)的微(wei)生物產品(pin)為菌(jun)體(ti)時，常(chang)采(cai)用這(zhe)種(zhong)方法(fa)，如(ru)活性(xing)幹(gan)酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,壹些(xie)以(yi)微(wei)生物菌(jun)體(ti)為活性物質的飼(si)料(liao)和(he)肥料(liao)。
　　1.3 比濁(zhuo)法
　　微生(sheng)物的(de)生(sheng)長(chang)引起(qi)培(pei)養物混(hun)濁(zhuo)度的增(zeng)高。通(tong)過(guo)紫外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)測(ce)定波(bo)長(chang)下的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)，判斷微(wei)生物的(de)生(sheng)長(chang)狀況(kuang)。對某(mou)壹培(pei)養物內(nei)的(de)菌(jun)體(ti)生(sheng)長(chang)作定時跟蹤時，可(ke)采(cai)用壹種特制的有側(ce)臂的(de)三角(jiao)燒(shao)瓶(ping)。將(jiang)側(ce)臂插(cha)入光電比色(se)計(ji)的比色(se)座(zuo)孔(kong)中，即(ji)可隨(sui)時測(ce)定其(qi)生(sheng)長(chang)情況(kuang)，而不(bu)必取(qu)菌(jun)液(ye)。該(gai)法主(zhu)要(yao)用(yong)於發酵(jiao)工業菌(jun)體(ti)生(sheng)長(chang)監(jian)測(ce)。如使用(yong)UNICO公司(si)的紫外(wai)-可見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)，在波(bo)長(chang)600 nm處用(yong)比色(se)管(guan)定時測(ce)定發酵(jiao)液的(de)吸(xi)光(guang)光度值(zhi)OD600，以(yi)此(ci)監(jian)控E.coli的生長(chang)及(ji)誘導(dao)時間(jian)。
　　1.4 菌(jun)絲(si)長(chang)度測(ce)量(liang)法(fa)
　　對於絲狀(zhuang)真(zhen)菌(jun)和(he)壹些(xie)放線(xian)菌(jun)，可(ke)以(yi)在培(pei)養基上測定時間(jian)內(nei)菌(jun)絲(si)生(sheng)長(chang)的長(chang)度，或是(shi)利用(yong)壹只壹端開(kai)口(kou)並(bing)帶有刻(ke)度(du)的(de)細玻(bo)璃管(guan)，到入合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基，臥(wo)放，在開(kai)口(kou)的(de)壹端接(jie)種微(wei)生(sheng)物，壹段時間(jian)後(hou)記錄(lu)其(qi)菌(jun)絲(si)生(sheng)長(chang)長(chang)度，借(jie)此(ci)衡(heng)量絲(si)狀微生物的(de)生(sheng)長(chang)。